Kvantitativno određivanje glukoze u krvi metodom glukoza oksidaze

Princip metode. Metoda se temelji na specifičnosti djelovanja enzima glukoza oksidaza. Ovaj enzim oksidira glukozu u prisustvu molekularnog kisika, čime se formira glukonolakton, koji se spontano hidrolizira u glukonsku kiselinu. Glukoza oksidaza oksidira glukozu da stvara vodikov peroksid (H₂Oh₂), koji reagira s 4-aminoantipirinom i fenolom pod djelovanjem peroksidaze. Kao rezultat, nastaje spoj ružičaste boje čija je optička gustoća pri 510 nm proporcionalna koncentraciji glukoze u uzorku.

glukoza + O₂ + H₂Oh → glukonska kiselina + H₂Oh₂

2 N₂Oh₂ + 4-aminoantipirin + fenol → kinonimin + 4H₂Oh

Oprema CPK, centrifuga, termostat, stalci, epruvete, pipete, biološki materijal, reagensi sadržani u radnoj otopini.

eksperimentalni uzorak, ml

standardni uzorak, ml

test u praznom hodu (N₂O), ml

Otopina za kalibraciju glukoze (referenca)

Epruvete se inkubiraju u termostatu na 37 ° C tokom 15 minuta, zatim se koloimetriraju na CPC-om sa zelenim filterom u kivetama debljine sloja od 5 mm prema praznom uzorku (N₂O). Ružičasta boja je stabilna 1 sat nakon inkubacije.

Proračun sadržaj glukoze proizvodi se formulom:

C =x C standard gdje

C je sadržaj glukoze u eksperimentalnom uzorku, mol / l,

Eop - optička gustina uzorka,

Jede - optička gustoća uzorka za kalibraciju,

C standard - sadržaj u otopini za kalibraciju, mol / l.

Normalne vrijednosti:  novorođenčad - 2,8-4,4 mmol / l

 deca - 3,9 -5,8 mmol / l

 odrasli - 3,9 - 6,2 mmol / l

Hipoglikemija (GHC).Povećanje glukoze u krvi proizlazi iz mnogih razloga prema kojima se razlikuju dvije skupine hiperglikemije.

1. Insularni - povezan je s nedostatkom inzulina u tijelu ili zbog neefikasnosti njegovog djelovanja.

2. Ekstrainsularni (ekstrainsularni) - ne ovisi o utjecaju inzulina.

U stvaranju HHC-a najvažniji su sljedeći procesi: povećana razgradnja glikogena, povećana neoglukogeneza, inhibicija sinteze glikogena, smanjena iskorištenost glukoze u tkivu pod utjecajem hormonskih antagonista inzulina: somatotropin, glukortikoidi, tiroksin, tirotropin.

Alimentarna hiperglikemija primjećuje se kod prekomjernog unosa glukoze u krv (na primjer, hiperglikemija s opterećenjem šećerom). Hiperglikemija jetre javlja se kod difuznih lezija jetre.

Perzistentna i teška hiperglikemija najčešće prati dijabetes. Uobičajeno je izolirati dijabetes melitus ovisan o inzulinu i dijabetes melitus neovisan od inzulina, odnosno šećernu bolest tipa I i šećernu bolest tipa II. Nastanak dijabetesa tipa I povezan je prije svega s oštećenom sintezom i metabolizmom inzulina.

Druga skupina hiperglikemije povezana je prije svega s hiperfunkcijom endokrinih žlijezda koje proizvode hormone - antagoniste inzulina. Primjećuje se kod bolesti poput Itsenko-Cushingovog sindroma i bolesti, akromegalije, tirotoksikoze, feokromocitoma i glukomanoma. Razina glukoze u krvi povećava se kod određenih oboljenja jetre (posebno kod 10-30% bolesnika sa cirozom jetre), hemokromatoze (pigmentirana ciroza jetre, bronzanog dijabetesa).

Hipoglikemija (GPG) - smanjenje glukoze u krvi - najčešće povezano s apsolutnim ili relativnim povećanjem razine inzulina u krvi. Ekstrapankreasna hipoglikemija bilježi se kao posljedica neravnoteže između težine procesa glikogenolize i glikoneogeneze u jetri kod akutnog i kroničnog hepatitisa, ciroze, akutne i subakutne distrofije jetre, intoksikacije alkoholom, trovanja arsenom, fosforom, s produljenom opstruktivnom žutom jetre, kobne jetre, opstruktivnom žuticom, sindromom opstruktivne žutice, sindromom opstruktivne žutice, sindromom jetre . Smanjenje koncentracije glukoze u krvi često se opaža kod pacijenata koji pate od raka jednjaka i drugih malignih tumora lokalizacije izvan pankreasa (fibroma, fibrosarkom, neuroma), kao i s neumoljivim povraćanjem, anoreksijom, jetrenim dijabetesom, uremijom, obilnom dojenjem i glukozurijom kod trudnica.

Hipoglikemija može biti centralnog porijekla zbog mentalne traume, encefalitisa, subarahnoidnog krvarenja, tumora mozga.

1. Nasljedni poremećaji u varenju ugljenih hidrata.

2. Koje su vam vrste hiperglukokemije poznate?

3. Koji su uzroci patološke hiperglukoemije?

4. Šta je uzrok dijabetesa melitusa ovisnog o insulinu?

5. Koji su biohemijski uzroci nasljednih bolesti: a) glikogenoza? b) aglikogenoza? c) fruktozemija? d) galaktozemije?

6. Koje su biohemijske promjene u metabolizmu ugljikohidrata tijekom posta?

7. Princip metode za određivanje tolerancije na glukozu.

Kada se propisuje metoda glukozida oksidaze?

Ovaj test se koristi za otkrivanje oslabljene tolerancije na šećer i razvoj predijabetesa, kao i na vrhuncu bolesti. Ali u takve se svrhe analiza rijetko koristi, to je zbog visokih troškova i dugog očekivanja rezultata. Najčešće se određivanje glukoze u krvi i urinu ovom metodom koristi u diferencijalnoj dijagnozi bolesti kao što su:

Šećer se smanjuje odmah! Dijabetes s vremenom može dovesti do čitavog niza bolesti, kao što su problemi s vidom, stanje kože i kose, čirevi, gangrena pa čak i kancerozni tumori! Ljudi su poučavali gorko iskustvo da normaliziraju nivo šećera. čitaj dalje.

sindrom intolerancije na laktozu,
intolerancija na fruktozu,
izlučivanje fruktoze telesnim tekućinama,
povećana koncentracija pentoze u urinu.

Nesumnjiva prednost testa za glukozida oksidazu je njegova preciznost.

Šta je osnova ove metode?

Postoje različite metode za određivanje koncentracije glukoze u krvi, ali glukozida oksidaza je najtačnija. Zasniva se na činjenici da se tijekom interakcije šećera sa atmosferskim kisikom reagens oksidira. U rastvor se oslobađa vodikov peroksid. Ova supstanca djeluje u interakciji s ortotoluidinom, čime nastaje obojeni spoj. Za ponašanje ove reakcije neophodno je prisustvo posebnih enzima. Tijekom reakcije oksidacije mora biti prisutna glukozida oksidaza, a pri bojenju tečnosti mora biti prisutna peroksidaza. Intenzitet boje otopine ovisit će o sadržaju glukoze i bit će najintenzivniji pri svom visokom sadržaju.

Suština određivanja glukoze oksidaze

Procjena rezultata događa se kvantitativnom metodom fotometrije nakon istog vremenskog razdoblja. Obavezno je koristiti otopinu za umjeravanje koja sadrži određenu deklariranu normu šećera i, počevši od nje, možete prosuditi koncentraciju glukoze u tjelesnim tekućinama, često u krvi.

Kako se provodi analiza?

Materijal se uzima od pacijenta na prazan stomak. Za test se koristi venska krv u količini od 5 ml. Uoči dijagnoze pacijentu je prikazana stroga dijeta. To će omogućiti prosudbu pouzdanosti rezultata i isključiti moguće pogreške u analizi. 2 dana prije uzimanja krvi pacijent bi trebao napustiti loše navike pijenja alkohola i pušenja. Također je potrebno ograničiti unos pretjerano slatke hrane i izbjegavati stresne situacije kad god je to moguće.

Da bi se dobila plazma sa šećerom, krv se centrifugira.

Najčešće se ova metoda određivanja koncentracije glukoze vrši centrifugiranjem, čime se elementi izoliraju. Količina šećera je već određena u plazmi. Kada mu se dodaju svi potrebni reagensi, boja se primjećuje nakon 20 minuta ako se ispitivanje provodi na sobnoj temperaturi. Proračun glukoze vrši se prema kalibracijskom rasporedu ili korištenjem pravila obroka.

Istraživački reagensi

Da biste odredili šećer, najprikladnije je koristiti ekspresne metode za određivanje glukoze u krvi. To je zbog jednostavne upotrebe i brzih rezultata. Osim toga, pacijent ne mora ići u laboratoriju ili bolnicu. Ali za razliku od testa glukozida oksidaze, takva je dijagnoza nepouzdana. Budući da glukozu ne razlikuje od ostalih šećera i određuje njihovu zajedničku koncentraciju.

Osnova reakcije glukozida oksidaze je natrijev klorid 9% -tni rastvor i cink sulfat 50%. Dodaju se u fazi centrifugiranja krvi. Pored toga koristi se puferska otopina sa sirćetnom kiselinom i natrijum acetatom. Metoda titracije određuje njen pH na 4,8. Nakon toga dodaje se glukozida oksidaza, zbog koje se oslobađa vodikov peroksid i peroksidaza, koji sudjeluje u bojenju otopine u željenu koncentraciju kako bi se dobio tačan rezultat.

Norme u analizi

Merenje šećera vrši se u posebnim jedinicama - milimolama po litri rastvora.

Krvni test glukozida oksidaze obavezan je na prazan stomak i za to koristite plazmu ili serum. Norma njegove količine za odrasle i za žene i za muškarce je 3,3-5,5. Za djecu mlađu od 15 godina ta je vrijednost nešto niža i kreće se od 3,2-5,3. U novorođenčadi je glukoza u krvi 1,7-4,2. Povećanje pokazatelja primjećuje se s razvojem bolesnika s dijabetesom melitusom ili s oslabljenom tolerancijom na glukozu. Ovo je stanje predijabetes, a ako se ne liječi na vrijeme, brzo će dovesti do razvoja ove teške patologije.

Čini li se da je još uvijek nemoguće izliječiti dijabetes?

Sudeći po tome što sada čitate ove redove, pobjeda u borbi protiv visokog šećera u krvi još nije na vašoj strani.

I jeste li već razmišljali o bolničkom lečenju? Razumljivo je, jer je dijabetes vrlo opasna bolest, koja, ako se ne liječi, može rezultirati smrću. Konstantna žeđ, ubrzano mokrenje, zamagljen vid. Svi su ti simptomi poznati iz prve ruke.

No, je li moguće liječenje uzroka, a ne posljedica? Preporučujemo čitanje članka o trenutnim tretmanima dijabetesa. Pročitajte članak >>